久青草影院丨免费黄网在线观看丨黄色短视频在线播放丨成人av动漫在线观看丨亚洲熟妇色xxxxx亚洲丨黄色av一级丨91亚色在线观看丨狠狠天堂丨亚洲第一在线播放丨亚洲欧洲偷自拍图片区丨你懂的视频在线播放丨国产精品综合色区小说丨香蕉视频免费丨亚洲妇熟xx妇色黄蜜桃丨日本一区中文字幕丨青青在线视频人视频在线丨亚洲最大福利视频网丨日批视频免费看丨国产精品一区12p丨aaaaa女高潮免费视频

葉綠素含量的測(cè)定

一、前言

葉綠素廣泛存在國(guó)術(shù)等綠色植物組織中，并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后，葉綠素即游離出來(lái)，游離葉綠素很不穩(wěn)定，對(duì)光、熱比較敏感；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素，在稀釋堿液中可水解成鮮綠色的葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種；葉綠素a和b，兩者均易溶于乙醇、yimi、丙酮和lvfang。

葉綠素的含量測(cè)定方法有多種，其中主要有：

1. 原子吸收光譜法：通過(guò)測(cè)定鎂元素的含量，進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量。
2. 分光光度法：利用分光光度計(jì)測(cè)定葉綠素提取液在大吸收波長(zhǎng)下的吸光值，即可用朗伯比爾定律計(jì)算出提取液中各色素的含量。
3. 葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有大吸收，且兩吸收曲線相交于652nm處。因此測(cè)定提取液在645nm、663nm、652nm波長(zhǎng)下的吸光值，并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。

葉綠素與其他顯色物質(zhì)一樣，在溶液中如液層厚度不變則其吸光度與它的濃度成一定的比例關(guān)系。已知葉綠素a、b在652nm波長(zhǎng)處有相同的比吸收系數(shù)（均為34.5）。因此，在此波長(zhǎng)下測(cè)定葉綠素溶液的吸光度，即可計(jì)算出葉綠素a、b的總量。

二、材料、儀器設(shè)備及試劑

1. 材料：水樣或植物中提取的葉綠素溶液
2. 儀器設(shè)備：電子分析天平；UV1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；漏斗：25ml容量瓶；剪刀；濾紙；玻棒等。
3. 試劑：95%乙醇、石英砂、碳酸鈣粉。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品的準(zhǔn)備

2.測(cè)定

取1CM的比色皿，倒入樣品，以95%乙醇為空白對(duì)照，在UV1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)625nm波長(zhǎng)下讀取吸光度（A）值。

五．計(jì)算

將測(cè)得的吸光度652nm波長(zhǎng)處的吸光度值輸入儀器公式，即可求得樣品中葉綠素濃度。所得結(jié)果再代入公式，即可得出樣品葉綠素的含量。

                A652

C（mg.ml-1)=    34.5

式中：C=葉綠素（a和b）的總濃度（mg.ml-1)

A652------  表示在652nm波長(zhǎng)下測(cè)得樣品中葉綠素的吸光度

34.5為葉綠素a和b混合溶液在652nm波長(zhǎng)的比吸收系數(shù)（比色皿光徑為1CM,樣品濃度為1g.L-1時(shí)的吸光度）。

葉綠素含量（mg.g-1Fw）=C（mg.ml-1)×提取液總量（mL）

                               樣品鮮重（g)

方法II

1. 目的

掌握葉綠素a、b含量測(cè)定的基本原理和方法。

2.原理

葉綠素a、b分別在663nm和645nm波長(zhǎng)處有大的吸收峰，同時(shí)在該波長(zhǎng)處葉綠素a、b的比吸收吸收K為已知，我們即可以根據(jù)朗博比爾定律，列出濃度C與吸光度A之間的關(guān)系式：

A663=82.04Ca+9.27Cb

A645=16.75Ca+45.6Cb

(1)、（2）式中的A663.A645為葉綠素溶液在波長(zhǎng)663nm和645nm時(shí)測(cè)得的吸光度。

Ca、Cb為葉綠素a、b的濃度，單位為mg,L-1.

82.04、9,27為葉綠素a、b在波長(zhǎng)663nm下的比吸收系數(shù)。

16.75、45.6為葉綠素a、b在波長(zhǎng)645nm下的比吸收系數(shù)。

解（1）、（2）式聯(lián)立方程，得：

Ca=12.70   A663-2.69 A645

Cb=22.9 A645-4.68A663

CT-Ca+Cb=20.21A645+8.02A663

Ca、Cb為葉綠素a、b的濃度，CT為總?cè)~綠素濃度，單位：（mg,L-1),利用上面（3,4,5）式可以分別計(jì)算出葉綠素a、b及總?cè)~綠素濃度。

三、材料、儀器設(shè)備及試劑

1. 材料：菠菜葉、薺菜葉或其他植物葉片
2. 儀器設(shè)備：電子分析天平：分光光度計(jì)：恒溫水浴鍋：25ml刻度試管；剪刀；試管；試管架；玻棒等。
3. 試劑：80%乙醇

四實(shí)驗(yàn)步驟

1. 葉綠素的提取
2. 從植株上選取有代表性的葉片數(shù)張（除去粗大葉脈）剪碎后混勻，快速稱取0.2g（可視樣品葉綠素含量高低而增減用量），置于25mL刻度試管中，加80%乙醇10ml左右，加塞放入60-80℃水浴中保溫提取葉綠素（或常溫下放在暗處浸提12~24h），至葉片全部褪綠為止，冷卻后，用80%乙醇定容至刻度，此液即為葉綠素提取液。
3. 測(cè)定
4. 取光徑為1CM的比色杯，加入葉綠素提取液距比色皿口1CM處，以80%乙醇作為對(duì)照，調(diào)到UV1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的多波長(zhǎng)測(cè)量狀態(tài)，得出663nm及645nm波長(zhǎng)下的吸光度值。

結(jié)果計(jì)算

將測(cè)定得到的吸光度A663、A645值分別代入式中計(jì)算出Ca、Cb及CT（即葉綠素a、b及葉綠素總量濃度）。再按下式計(jì)算出葉綠素a、b及葉綠素總含量。

葉綠素a含量（mg.g-1Fw)=      Ca×提取液總量（ml)  

                             樣品鮮重（g）×1000 

葉綠素b含量（mg,g-1 Fw)=     Cb×提取液總量（ml) 

                                樣品鮮重（g)×1000

葉綠素總含量（mg.g-1Fw)=     CT×提取液總量（ml) 

                                樣品鮮重（g)×1000

后計(jì)算出葉綠素a/葉綠素b的比值，并加以分析。

原理

根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見(jiàn)光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度，即可用公司計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比，即A=acl   式中a比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1CM時(shí)，a為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)可通過(guò)測(cè)定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在響應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的綜合。這就是吸光度的加和性。此次試驗(yàn)測(cè)定葉綠素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a、b 時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的大吸收峰。

二．材料、儀器設(shè)備及試劑

• 材料：新鮮（或烘干）的植物葉片。
• 儀器設(shè)備：1.UV1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；2。電子頂載天平（感量0.01g);3.研缽；4.棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量濾紙；7.吸水紙；擦境紙；9滴管。
• 試劑：96%乙醇（或80%丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉。

三．實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或干材料，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈）混勻。2.稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3mL 95%乙醇，研成均漿，再加乙醇10mL，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3`5min.3.取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤(rùn)，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過(guò)濾到25mL棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?/span>4.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。后用乙醇定容至25mL，搖勻。5.把葉綠體色素提取液倒入光徑1CM的比色皿內(nèi)，以95%乙醇為空白，在UV1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)單機(jī)模式，多波長(zhǎng)測(cè)量中得出 波長(zhǎng)665nm、649nm下的吸光度值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式中：

Ca=13.9665-6.88A649;Cb=24.96A649-7.32A665.據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb;mg/L），二者之和為總?cè)~綠素的濃度。后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量；

葉綠素的含量（mg/g)=[葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)】/樣品鮮重（或干重）。